程颖：循环蛋白质在小蛋白质肺癌临床研究中的进展

反转肝细胞( Circulating tumor cells，CTCs)作为一种可替代原发的“液体恶性肿瘤骨头”，已在移出性丙型肝炎、癌和结高尸压中的用于肉食动物率评价。小肝细胞白血病(Small celllung cancer，SCLC)的组织骨头缺少过剩，且过剩有效的系统对入院移出和预期肉食动物率的生命体圣万。近来分析者CTCs在SCLC中的的临床分析技术的的发展透过了探索性分析，注意到CTCs对SCLC的诊断、依此，系统对入院、移出，评估、肉食动物率以及构建个体化病人方案等很强关键性意义，本文就CTCs在SCLC临床分析技术的的发展中的的分析进展予以综述。

一、SCLC患儿CTCs的验证方式

CTCs的验证方式主要有流式肝细胞验证技术( fluocytometry，FCM)、逆转录一聚合酶链化学反应(reverse-transcriptionPCR，RT-PCR)、CellSearch系统、CTC芯片(CTC-chip)技术和腹腔滤过分离肝细胞技术(isolation by size of epithelial tumor cells．ISET)等，其中的CellSearch系统因其半自动化的系统设计SDK，较高的特异性、敏感性和可重复性，成为最常会技术的的发展的CTCs验证方式。

早在2004年，Allard等率先技术的的发展CelISearch国法验证了99事例白血病（未曾列举SCLC事例数）患儿的CTCs，随后Nagrath等运用于CTC-chip国法验证了55事例白血病患儿外周尸C TCs。2009年以后的分析多运用于CeIISearch国法验证SCI．C患儿外周尸CTCs，然而该方式由于对过剩淋巴构造的肝细胞不会出现漏检似乎，且与免疫磁珠及抗体结合的CTCs无国法行某些后续的验证，临床分析技术的的发展受到局限。

近来，随着纳米信息技术的的发展，特异性CTCs表面圣万的特异性识别分f修饰的纳米材料结合薄流控技术的CTCs验证SDK的分析受到为广泛关注，2013年，《自然》（Nature）杂志将CTCs纳米验证评为最具创新性和转变成潜力的诊断新方式，成果难以置信瞩目。但就现在来看，除此以外的CTCs验证方式各有利弊，未曾有分析推测哪种方式对SCLC的CTCs验证格外有优势。着眼愿景，亟须整合特异性、敏感性格外高的CTCs验证技术，为SCLC的基础和临床分析分析促使冲破。

二、CTCs在SCLC临床分析技术的的发展中的的分析现状

（一）CTCs枚举与SCLC的诊断、依此

近来多项分析说明了CTCs枚举高水平与SCLC的诊断、依此有保持良好关系0 2009年Tanaka等技术的的发展CeIISearch国法验证了1 50事例7.5ml外周尸CTCs，其中的白血病1 25事例、非恶性25事例，白血病患儿仅限于116事例非小肝细胞白血病(non-small cell lung cancer，NSCLC)和9事例SCLC。

分析最近SCLC患儿CTCs阳性率为66.70-/0（6事例／9事例），明显高于NSCLC患儿的CTCs阳性率(胰脏25.9%，鳞癌40.9%；胰脏对比SCLC，P

旋即，Hou等技术的的发展CeIISearch国法验证了50事例初治的SCLC患儿外周尸CTCs，仅限于20事例局限期SCLC (limited disease，LD-SCLC)患儿和30事例为广泛期SCLC(extensive disease，ED-SCLC)患儿，弧期ED-SCLC及LD-SCLC患儿的中的位CTCs枚举大致相同237和2个/7.5ml尸，7事例未曾检出CTCs的患儿原则上为LD-SCLC，假定CTCs枚举高水平与SCLC依此涉及。

十分相似的正确性在2012年被日本史学家Naito等推测，分析者在51事例SCLC患儿中的立用CeIISearch国法验证弧期CTCs高水平，最近ED-SCLC,患儿的中的位CTCs枚举为9.5个f 7.5ml尸，而LD-SCLC仅为1个／7.51111尸，全面假定ED-SCLC患儿的CTCs高水平高于LD-SCLC患儿。

（二）CTCs评估SCLC的及肉食动物率

CTCs到底可作为评估SCLC和肉食动物率的有救指f,匙分析者们一直在探讨的问题。Houi等在2009年通过CellSearch国法验证了50事例SCLC患儿(LD-SCLC20事例，ED-SCLC30事例)的CTCs，注意到CTCs>300个/7.5ml尸的患儿及CTCs

弧期CTCs>=50和

在该分析中的SCLC患儿的肉食动物率不属于数值实体化8个/7.5ml尸，更进一步将患儿分为CTCs>=8及

Hiltermann等在2012年同样技术的的发展CellSearch国法验证59事例SCLC患儿在弧期、1间隔病人后及4间隔病人结束后外固尸CTCs高水平，其中的ED-SCLC患儿38事例，LD-SCLC患儿2 1事例c弧期有43事例患儿(730-/o)CTCs≥2个/7.5ml尸，CTCs>215个/7.5ml尸和CTCs

经过1间隔病人后患儿CTCs高水平明显降低，且1间隔病人后CTCs

分析者推断CTCs高水平是SCLC肉食动物率的独立自主影响因子，其中的1间隔病人后CTCs高水平是SCLC和肉食动物率最强的预期因子。

2013年ASCO发表的ECOG1508分析中的，分析者试图在155事例ED-SCLC中的转至特异性病人，并对其中的123事例患儿弧期CTCs透过验证，最近特异性病人未曾能延长ED-SCLC患儿的PFS和OS，但注意到弧期CTCs≤l00和CTCs>100个／7.5ml尸的mPFS大致相同4.4和4.3个翌年（P=0.07），OS大致相同10.7和7.2个翌年(P=0.01)。分析者显然虽然特异性病人没人能提高ED-SCLC患儿的PFS和OS，但却注意到了CTCs似乎是SCLC患儿的肉食动物率圣万。

最近，Igawa等试图技术的的发展OBP-401试验中验证SCLC患儿外周尸CTCso技术的的发展OBP-401试验中验证丙型肝炎和胃癌患儿CTCs的涉及分析已有中期另据。分析纳入30事例韧治的SCLC患儿，29事例患儿(96%)外周尸CTCs阳性。在弧期，21事例患儿CTCs

（三）CTCs系统对SCLC的入院和移出

除此以外的分析假定通过验证CTCs的出现来系统对SCLC的入院和移出很强关键性的临床分析意义o Tanaka等分析注意到CTCs高水平‘j 125事例白血病患儿（仅限于9事例SCLC患儿）进展明显涉及，相当多是与周围移出保持良好（AUC-ROC 0,873 p

基于这些数据，作者显然CTCs可作为系统对白血病周围移出的生命体标记物。Natio等分析注意到SCLC在弧期、病人结束后及入院后CTCs的阳性率大致相同68.6%、26.5%和67.6，示意SCLC入院后外周学CTCs高水平升高，起因周围移出脊柱的比率为0、1和>=2的患儿其中的位CTCs枚举大致相同2.0、7.5和21个/7.5ml尸,示意CTCs高水平与周围移出脊柱的比率有关，周围移出越多，CTCs枚举越高（p

三、CTCs在SCLC临床分析技术的的发展中的的探索斜向

入院和移出是造成了患儿病人失败和死亡的主要原因，马上注意到的入院和移出并采敢积极有效的病人措施可相当大提高患儿肉食动物率。然而，由于SCLC过剩能够系统对入院和移出的生命体圣万，且值得注意检查和检查无国法注意到薄移出灶及薄小残留病灶，造成了起因入院和移出的SCLC患儿不能马上接受诊断和病人。

临床分析中的部分LD-SCLC的患儿肉食动物率差异很小，示意有些局限期的患儿在诊断时似乎已起因了检查和不能注意到的薄移出而成为潜在的为广泛期患儿。通过验证外周尸CTCs的出现及比率变化从而对SCLC患儿体内状态透过系统不会、动态地系统对和评价，马上注意到的入院、移出，将有助于临床分析医生对病人适时的把握和病人策略的同样，但究竟CTCs的比率或变化数值为多寡时能够精确体现SCLC的入院或移出尚能不明确，能够格外多的循证临床证据予以拥护。

CTCs在评估SCLC患儿病人之外的技术的的发展尚能东南面探索阶段性，病人流程中的CTCs比率的变化与SCLC患儿病人的涉及性及其与SCLC患儿超声适时的同样等问题在愿景须大量的临床分析分析。近5年，对CTCs到底可作为SCLC患儿肉食动物率指标的分析逐渐增多，但SCLC最佳的肉食动物率CTCs不属于数值尚能无定论，争议相当多。

其中的3项来自Hou、Naito、Hiltermann的分析将SCLC的肉食动物率CTCs畀定数值分别实体化为50、8和2个／7.5ml尸，差异很大，这似乎与分析运用于的统计分析方式不尽相同以及入组样本量较寡有关。近期那不勒斯史学家Normanno等论调将ED-SCLC和LD-SCLC患儿分开分析，对弧期、l间隔病人后CTCs以及病人前后CTCs的变化数值分别实体化肉食动物率不属于数值，为愿景的分析备有了新的渐进。来龙去脉所在的科研团队也正致力于要务SCLC患儿肉食动物率最佳CTCs不属于数值的分析，结果难以置信所想。

的个体化病人是病人模式的的发展斜向。SCLC患儿对病人药物的化学反应存在明显的譬如说，其主要原因似乎与复杂的异质性、基因表达差异及多态性有关。所以，逐步清晰SCLC的DNA学构造对实现真正意义上的SCLC个体化病人尤为关键性。近期要务史学家王洁等分析医护人员通过技术的的发展单肝细胞基因测序手段对患儿单个CTC透过全DNA、外显子DNA测序。

在此项分析中的，谢晓亮教授造出的多重退火和环化反转的扩增技术(MAIBAC)，成功实现了对患儿外周尸单个CTC的全DNA扩增和深度测序，在单个肝细胞高水平测定全DNA基因拷贝数变异(CNVs)和单氨基酸变异(SNVs)o单肝细胞高水平CTCsDNA测序技术可马上备有如MRSA基因突变等个体化病人所须的关键性信息，同时也为愿景SCLC特异性药物的整合备有的产品。

SCLC的组织骨头难以利用，管制了后续各项检验分析的组织起来，而利用CTCs构建的SCLC反转肝细胞移植瘤( CTC-derived explants，CDXs)模型，再一解决这一棘手难题。最近，Hodgkinson等试图将6事例ED-SCLC患儿lOml外周尸中的的CTCs提取后注射到免疫缺陷血清皮下，结果在4只血清身上演化成了CDXs，假定SCLC患儿的CTCs很强致瘤性。

同时技术的的发展CelISearch国法验证这6事例SCLC患儿的CTCs，最近成功演化成CDXs的4事例患儿的CTCs枚举原则上>400个／7.5ml尸，而另外2事例未曾演化成CDXs的患儿其CTCs枚举大致相同222和20个／7.5ml尸，示意SCLC的CTCs致瘤性与外周尸CTCs教量有关。全面分析注意到相比较于病人敏感性SCLC，病人MRSA性SCLC患儿的CDXs倍增一段时间短、生长格外迅速。对3事例CDXs给予顺铂和充分利用泊苷病人药物，其敏感性顺序为CDX3>CDX2>CDX4，相应患儿的OS大致相同9.7.3.5.0.9个翌年，示意对CDXs透过体内药敏试验中可以间接化学反应患儿肉食动物一段时间。

该分析说明了部分SCLC的外周尸CTCs很强干肝细胞特性，可透过体内培养、演化成与原发高度十分相似的CDXs，为SCLC患儿的体内药敏试验中、MRSA机制分析等一系列检验分析备有了足量的的组织，解决了SCLC患儿骨头缺少过剩的问题。

正确性

从现行的分析可以看出，虽然CTCs在SCLC中的的临床分析技术的的发展仍东南面探索阶段性，但前景广阔。现在，诸多转变成性分析即将透过中的，确信随着分析的不断深入，CTCs再一成为SCLC的冲破口，所想CTCs在SCLC的领域中的为我们促使令人兴奋。

编辑： 寒